تهیه کونژوگه پلی ساکارید PRP هموفیلوس آنفلوآنزا تیپ b با اگزوتوکسین …
۱-۱-۶ کپسول…………………………………………………………………………………………………………………۳۴
۱-۲-۶- دخالت کپسول در بیماری‌زایی………………………………………………………۳۶
۱-۳-۶- ژنتیک بیان کپسول………………………………………………………….۳۶
۱-۱-۸ روشها و آزمونهای تشخیص آزمایشگاهی………………………………………………………۳۸
۱-۲-۸ روشهای تشخیص کلاسیک……………………………………………………………………………………….۳۸
۱-۳-۸- معایب تشخیص کلاسیک……………………………………………………………………………………۳۹
۱-۴-۸- برتری روشهای تشخیص مولکولی………………………………………………………………………………..۴۰
۱-۱-۹- اپیدمیولوژی …………………………………………………………………………..۴۰
۱-۱-۱۰- پیشگیری …………………………………………………………………………………………….۴۴
۱-۱-۱۱- درمان……………………………………………………………………………………………………………۴۵
۲-۱ واکسن های کونژوگه…………………………………………………………………….۴۸
۲-۲- واکسن‌های Hib………………………………………………………………………………………..۴۹
۲-۳- پاسخ های واکسن کونژوگه…………………………………………..۵۰
۲-۴- پاسخ های واکسن پلی‌ساکاریدی…………………….۵۱
۲-۵- عوامل دخیل در ایمونوژنسیتی واکسن های کونژوگه پلی ساکاریدی – پروتئینی………………………………………………………………..۵۱
۲-۵-۱- طول زنجیره پلی ساکاریدی ………………………………..۵۱
۲-۵-۲- نوع اتصال…………………………………………………………………………………………………۵۲
۲-۵-۳- مولکول های حامل ……………………………………………………۵۲
۲-۶-EDC یا EDAC…………………………………………………………………………………………۵۲
۲-۷- کونژوگاسیون به روش آمیداسیون ………………………………………………………۵۳
۲-۸- تهیه کونژوگه ایمونوژن هاپتن۱ – حامل……………………………………………………….۵۴
۲-۹- پروتئین های حامل مناسب برای ایجاد کونژوگه های آنتی ژنیک…………………………………………………..۵۵
| برای دانلود متن کامل این پایان نامه به سایت pipaf.ir مراجعه نمایید. |
۲-۱۰- ادجوانت های مناسب در طراحی واکسن کونژوگه………………………………………………………………………………….۵۶
۲-۱۱- سنجش فعالیت باکتری کشی……………………………………………………………………۵۶
فصل سوم- مواد و روش ها
۳-۱-۱ مواد و وسایل لازم ……………………………………………………………………۶۰
۳-۲-۱- تهیه میکروارگانیسم های به کار گرفته شده در این مطالعه……………………………………………………………………………………………………۶۶
۳-۲-۲-باز کردن سویه باکتری همو فیلوس آنفولانزای تیپ b لیوفیلیزه و کشت آن……………………………………………………………۶۶
۳-۲-۳-فرآوردن و تخلیص PRP………………………………………………………………………………………………………..۶۶
۳-۲-۴- تهیه بذر محیط کشت …………………………………………………..۶۶
۳-۲-۵-تیمار عصاره مخمر…………………………………………………………………..۶۷
۳-۲-۶-آماده کردن فرمانتور و تلقیح بذر ………………………………………………………………………………………………..۷۰
۳-۲-۷-نمونه گیری از فرمانتور…………………………………………………..۷۲
۳-۲-۸- مرحله رسوب دهی الکلی………………………………………..۷۳
۳-۲-۹- مرحله الکل زنی ……………………………………………………………………….۷۳
۳-۲-۱۰- مرحله شست و شو با کلریدمنیزیم………………………………………………………………………………………….۷۴
۳-۲-۱۱- تیمار با ستاولن…………………………………………………………………………۷۴
۳-۲-۱۲- افزودن فسفات سدیم………………………………………………….۷۵
۳-۲-۱۳- مرحله الکل زنی مجدد…………………………………………..۷۵
۳-۲-۱۴- تیمار با هیدروکسیل آپاتیت………………………………۷۵
۳-۲-۱۵- فیلتراسیون سوپرناتانت …………………………………………۷۶
۳-۲-۱۶- لیوفلیزاسیون ……………………………………………………………………………….۷۶
۳-۲-۱۷- تعیین خلوص PRP تخلیص شده ………………………………………………………………………………………………………….۷۶
۳-۲-۱۸- تست ریبوز …………………………………………………………………………………۷۶
۳-۲-۱۸- ۱- اساس تست بیال …………………………………………..۷۷
۳-۲-۱۸- ۲- معرف‌های تست بیال ……………………………….۷۷
۳-۲-۱۸- ۳-محلولها و ترکیبات ………………………………………….۷۷
۳-۲-۱۸- ۴-تهیه‌ی محلولهای استاندارد ریبوز ………………………………………………………………………..۷۷
۳-۲-۱۸- ۵- آماده سازی PRP تخلیص شده ……………………………………………………………………………….۷۹
۳-۳-۱- آزمون های پروتئین سنجی ……………………………………………………………………………………………….۷۹
۳-۳-۲روش برادفورد …………………………………………………………………………………..۸۱
۳-۳-۳- روش پروتئین سنجی Lowry ………………………………………………………………۸۱
۳-۴-۱- آزمون ایمونو ژل دیفیوژن ………………………………………………………………….۸۳
۳-۵- سنجش نوکلئیک اسید …………………………………………………………………………………………………….۸۳
۳-۶-تخلیص اگزوتوسین A سودوموناس آئروژینوزا PA103 …………………………………………………………………….۸۴
۳-۶-۱- طرز باز کردن سوش لیوفیلیزه جدید …………………………………………………………………………..۸۴
۳-۶-۲-تهیه لوله بذر ……………………………………………………………………………………….۸۴
۳-۶-۳- اطمینان از خالص بودن سوش …………………………………………………………………………..۸۵
۳-۶-۴- تست سوش برای تولید اگزوتوکسین A ………………………………………………………………………………………………..۸۵
۳-۶-۵-تهیه محیط کشت ………………………………………………………………………۸۵
۳-۶-۷- رسوب با استات روی ۱ مولار ………………………………………………………….۸۷
۳-۶-۸- رسوب با سولفات آمونیوم …………………………………………………………………………………………..۸۷
۳-۶-۹- دیالیز اگزوتوکسین A …………………………………………………………………………….۸۸
۳-۶-۱۰- کروماتوگرافی فیلتراسیون ژل اگزوتوکسین A ………………………………………………………………………………..۸۹
۳-۱۶-۲-۱مواد مورد نیاز: ………………………………………………………………………۸۹
۳-۶-۱۱سنجش تولید اگزوتوکسین ………………………………………………………..۸۹
۳-۶-۱۱-۱-سنجش توکسیسیتی ……………………………………………………………………………….۹۰
۳-۶-۱۲- دتوکسیفای کردن اگزوتوکسین A به روش فرمآلدیئد ……………………………………………………………………………۹۱
۳-۷- ژل فیلتراسیون جهت تخلیص کونژوگه PRP هموفیلوس آنفولانزای تیپb (Hib) با اگزو توکسین A سودوموناس آئروژینوزا …………………..۹۲
۳-۸- آزمون های کنترل و کیفی کونژوگه …………………………………………………………………………………………………………………………………………………………….۹۲
۳-۹- سنجش پروتئین …………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………۹۲
۳-۱۱- تعیین میزان اسید نوکلئیک …………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………..۹۳
۳-۱۲- کنترل توکسیسیته غیرعادی((Abnormal toxicity ……………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………۹۴
۳-۱۳- آزمون پیروژنی ……………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………….۹۴
۳-۱۴- ایمیونیزاسیون خرگوشها و خونگیری …………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………۹۴
۳-۱۵تهیه بافر باربیتال : ………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………..۹۴
۳-۱۶- تهیه محلول کوماسی بلو و رنگ بر : ……………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………….۹۴
۳-۱۶- پلی آکریل آمید ژل الکتروفورز درحضور سدیم دو دسیل سولفات(SDS-PAGE) ………………………………………………………..۹۶
۳-۱۶-۱- اصول روش SDS-PAGE …………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………….۹۶
۳-۱۶-۳- محلولهای مورد نیاز ……………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………….۹۷
۳-۱۶-۴- تهیه ژل پایین SDS-PAGE ………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………….۹۷
۳-۱۶-۵- تهیه ژل بالا با SDS-PAGE …………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………۹۸
۳-۱۶-۶-رنگ آمیزی ژل پلی آکریل آمید ………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………۹۹
۳-۱۶-۷- محلولهای مورد نیاز ………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………۱۰۰
۳-۱۶-۸- روش رنگ آمیزی …………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………۱۰۱
۳-۱۷- آزمون بررسی فعالیت باکتریسیدالی سرم حیوان ایمیون (SBA[1]) ………………………………………………………………………………………………………………………………….۱۰۱
۳-۱۷-۱- اصول آزمون SBA ………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………….۱۰۱
۳-۱۷-۲- مواد مورد نیاز برای آزمون SBA Serum Bactericidal Assay)) …………………………..۱۰۱
۳-۱۷-۳-روش انجام آزمون ……………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………۱۰۲
فصل چهارم: نتایج
۴-۱-کشت سویه باکتری……………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………….۱۰۷
۴-۲- شرایط کشت در فرمانتور……………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………..۱۰۸
۴-۳- تعیین خلوص PRP ………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………………
